Подготовка к ПЦР-исследованиям
Что такое анализ методом ПЦР
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это метод молекулярной биологии, который позволяет обнаружить в биоматериале фрагменты ДНК или РНК конкретного возбудителя или генетическую особенность человека.
Для лабораторной диагностики чаще всего применяются два варианта ПЦР:
- ПЦР в реальном времени — позволяет не только подтвердить наличие патогена, но и определить его количество, что важно для оценки степени инфицирования и контроля эффективности лечения.
- ПЦР с обратной транскрипцией — используется, когда нужно исследовать РНК-вирусы (например, SARS-CoV-2, вирусы гриппа, гепатита C, ВИЧ, энтеровирусы и другие) даже при очень малом их количестве.
Применение ПЦР в клинической практике
Метод ПЦР ценится в диагностике за то, что он способен выявить инфекцию на самых ранних стадиях, когда возбудителя ещё мало, а антитела либо симптомы могут отсутствовать. Высокая точность этого метода напрямую зависит от того, насколько правильно был собран биоматериал.
Ключевое преимущество ПЦР перед многими другими методами — возможность исследовать практически любой клинический материал: кровь, мазки, соскобы, слюну, мокроту, мочу, спинномозговую жидкость, биоптаты. Поэтому, спектр применения ПЦР в клинической практике достаточно широк, и условно все исследования можно разделить на несколько групп.
Диагностика инфекционных заболеваний — самое распространённое направление. Методом ПЦР выявляют возбудителей урогенитальных инфекций (хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, трихомонады, гонококки, кандиды, гарднереллы), респираторных инфекций (в том числе SARS-CoV-2), вирусных гепатитов B и C, цитомегаловирус, вирус герпеса, вирус папилломы человека, а также возбудителей нейроинфекций и внутриутробных инфекций. Для каждой группы инфекций используется свой тип биоматериала.
Генетические исследования включают выявление наследственной предрасположенности к заболеваниям, генотипирование ферментов метаболизма лекарственных средств, определение чувствительности или резистентности к препаратам. Кроме того, метод ПЦР используется в криминалистике, определении отцовства и выявлении генетически модифицированных организмов.
В акушерстве и педиатрии ПЦР применяется для пренатальной диагностики и неонатального скрининга.
Онкологическая диагностика — относительно новое, но активно развивающееся направление. ПЦР позволяет обнаруживать клинически значимые маркеры злокачественности, выявлять микрометастазы и минимальную остаточную болезнь, а также контролировать результаты терапии.
Основные виды анализов, которые сдаются методом ПЦР
ПЦР проводят с разными биоматериалами — выбор зависит от того, где предположительно находится возбудитель.
| Материал | Что обычно исследуют | Особенности подготовки |
|
Мазок из ротоглотки (зева) |
Респираторные вирусы, бактерии | Сдаётся натощак или не ранее чем через 3 часа после приёма пищи. В этот период разрешено пить только воду. За 3 часа до процедуры нельзя чистить зубы, полоскать рот и горло, использовать жевательную резинку и освежитель дыхания. Курение необходимо исключить как минимум за 30 минут до взятия мазка, а лучше — за час. |
| Мазок из урогенитального тракта | ИППП, хламидии, микоплазмы, герпесвирусы и др. | За 2–3 дня до сдачи мазка необходимо исключить половые контакты, использование вагинальных свечей, тампонов, спринцевание, применение антисептических средств, а также кольпоскопию и УЗИ с вагинальным датчиком. Гигиенические процедуры наружных половых органов проводятся накануне вечером тёплой водой без мыла. Утром перед анализом их проводить не нужнл, чтобы не смыть естественную микрофлору и не исказить картину. За 2–3 часа до взятия мазка и мужчинам, и женщинам не рекомендуется мочиться — это правило одинаково важно для обоих полов. У женщин мазок не берут во время менструации и в течение 2–3 дней после её окончания. Если анализ проводится для контроля лечения, оптимально выдерживать паузу 3–4 недели после завершения антибиотикотерапии. |
| Эякулят | ИППП, хламидии, гонококк, трихомонады, микоплазмы, уреаплазмы, герпесвирусы и другие; иногда — состав микрофлоры мочеполового тракта | Перед сдачей эякулята рекомендуется половое воздержание в течение 3 дней. Материал собирается после гигиенических процедур, без использования смазки и презервативов. Сбор не производится при обильных гнойных выделениях из уретры, а также ранее чем через месяц после лечения антибиотиками. |
| Кровь | Вирусные инфекции, некоторые бактерии, генетические исследования | Сдаётся утром натощак. Допускается лёгкий ужин накануне, но не позднее чем за 8–12 часов до процедуры. За сутки до анализа необходимо отказаться от алкоголя, а за час — от курения. Перед сдачей крови рекомендуется 20 минут спокойного отдыха. Накануне следует избегать эмоциональных и физических перегрузок. Отдельное ограничение касается внутривенных инъекций гепарина и инфузий препаратов для парентерального питания, их необходимо исключить не менее чем за 6 часов до взятия крови, поскольку гепарин может влиять на ход ПЦР. |
| Моча | Инфекции мочеполовой системы, некоторые вирусы | Для ПЦР-исследования мочи используется первая утренняя порция (5–10 мл), собранная после тщательного туалета наружных половых органов. Если собрать первую порцию утром не удаётся, допускается сбор в течение дня, но при условии, что после последнего мочеиспускания прошло не менее 3–4 часов. Накануне следует исключить продукты, способные изменить цвет мочи (свёкла, морковь). |
| Кал | Кишечные инфекции: ротавирусы, норовирусы, аденовирусы, энтеровирусы; при необходимости — бактерии и паразиты | Пробу желательно взять в первые дни болезни. Кал собирают из средней части дефекации, без примеси мочи. Нельзя собирать после клизмы или ректальных свечей. Накануне обычно исключают слабительные, свечи, масла и лекарства, влияющие на стул. Для ПЦР-исследования, например, на шигеллы, сальмонеллы, кампилобактерии сдаётся до начала приёма антибиотиков. Если это невозможно, анализ проводят не ранее чем через 12 часов после приёма препарата. |
| Мокрота | Возбудителей инфекций дыхательных путей, чаще всего микобактерий туберкулёза; также могут выявлять вирусы, бактерии и грибы в зависимости от назначения | Мокроту собирают утром до еды: чистят зубы, полощут рот водой, делают несколько глубоких вдохов и откашливают мокроту — не слюну и не слизь из носоглотки — в стерильный контейнер. Обычно требуется не менее 1–3 мл материала; при плохом отхождении мокроты врач может назначить отхаркивающее средство. |
